400-666-3332 会员登录 购物车
左侧二维码
概述 您现在的位置是:北京康润诚业生物科技有限公司 > 概述
DNA提取纯化技术概述
质粒DNA的提取与纯化

质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1 kb至200 kb以上不等。通常情况下,质粒可持续稳定地处于染色体外的游离状态,具有自主复制功能;但在一定条件下也会可逆地整合到宿主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。

质粒已成为核酸克隆和测序最常用的载体。质粒DNA提取的产量和纯度直接关系到下游实验操作的成败。提取质粒DNA的方法很多,目前应用最为广泛的是碱裂解-中和法,其基本原理为:当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性;当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时保留在上清液中;蛋白质与染色体DNA不能复性而呈絮状,离心时可沉淀下来。
质粒DNA的纯化方法通常是利用了质粒DNA相对较小以及共价闭环这两个性质,例如氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法。但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提,RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤即可去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA可满足酶切、转化、探针标记、测序等要求。然而该方法耗时较长,需要接触苯酚、氯仿等有毒溶剂,而且所提取的质粒 DNA有时不能被限制性内切酶完全消化,因此在追求效率的今天,这种方法已逐渐被质量可靠、快捷便利的离心吸附柱纯化方法所代替。

GenStar公司提供的StarPrep质粒快速小量提取试剂盒和StarPure超纯质粒快速小量提取试剂盒采用离心吸附柱纯化法,适用于提取20 kb以下的质粒DNA,具有提取产量高、纯度好、快速简便、效果稳定等优点。StarPure超纯质粒大量提取试剂盒采用了溶液沉淀法纯化,可去除细菌内毒素,对质粒的损伤小,质粒丢失少,对大型质粒也可以有效提取。

线性DNA片段的纯化

PCR产物或酶促反应的DNA片段中所含的酶、盐类、残留引物、dNTP和其他DNA片段有可能影响后续反应的效果,故需经过纯化处理。 对于电泳检测观察到的单一条带,可以采用乙醇沉淀回收或单纯过柱回收方法;对于有非特异性条带或其他杂带的DNA片段,则有必要进行胶回收纯化。目前商品化的DNA片段回收试剂盒多采用硅胶基质材料特异性地吸附DNA,通过高盐/乙醇洗脱,清除杂质。由于各种试剂盒所采用的硅胶基质材料不同,DNA片段的回收效率也存在着很大的差异。

GenStar公司提供的StarPrep快速胶回收试剂盒和StarPrep PCR/DNA片段纯化试剂盒采用高吸附性能的硅胶膜,配以优化的膜结合缓冲液和膜漂洗液,操作步骤简单快速,回收效率高、效果稳定。
基因组DNA的提取、纯化
基因组DNA相对稳定,故其提取方法也相对简单。通常细胞通过表面活性剂处理,释放出基因组DNA,经过蛋白酶和RNA酶消化后,经有机溶剂抽提和乙醇沉淀或过柱纯化即可获得一定量的基因组DNA。目前商品化的基因组DNA提取试剂盒分为溶液型和离心吸附柱型两种。溶液型产品价格经济,产率高,可获取适用于建立文库的高分子量DNA,并且可尽可能地回收稀有样品中的DNA;但操作过程较为繁琐,对操作者的实验技能要求较高。离心吸附柱型产品使用方便、快速,提取的DNA 纯度较高,但价格昂贵,产量偏低,并且得到的片段多在20 kb左右,不适合建立DNA文库或用作长片段PCR产物的模板。

高纯度、完整的核酸是获得后续实验成功的关键因素,而高产率对稀有样品而言具有非常重要的意义。GenStar公司经过精心挑选优质原料,并优化试剂配方和实验流程,开发了一系列用于不同样品的溶液型基因组DNA提取、纯化产品。DNAzol适用于从动物细胞或组织、细菌、昆虫、真菌等样品。DNAzol WB系在DNAzol的基础上增加了红细胞裂解液,专门用于从全血中提取基因组DNA。针对植物组织细胞壁较厚,基因组DNA提取存在一定难度的问题,GenStar公司特别推出了一系列植物基因组DNA提取试剂盒。普通型产品(Cat. No. D101)可以高效地提取绝大多数科研用植物样品的基因组DNA,较传统方法获取的DNA纯度更高,适用于各种后续分子生物学实验操作;快速(Rapid)植物基因组DNA提取试剂盒适宜拟南芥等幼嫩植物样品,可在20~30分钟内获取质量可靠的基因组DNA作为PCR模板;超速(Magic)植物基因组DNA提取试剂盒可在10分钟内从拟南芥的叶片或花中获得PCR模板,尤适于高通量筛选。

康润生物,伴您生命科学成功之路         京ICP备11028165号          400-666-3332
北京市昌平区生命园路9号院  仪器楼三层  京公网安备案11011402000083号