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T111 StarMut Site-directed Mutagenesis Kit
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T111-01
10 rxn
770
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StarMut Site-directed Mutagenesis Kit采用反向PCR (Inverse PCR) 技术,对含有目标基因的双链环状质粒进行扩增,直接导入突变序列,从而实现单个或多个邻近碱基的置换(substitution)、缺失(deletion)或插入(insertion)。该技术的原理如图所示。首先以甲基化的质粒DNA为模板,使用人工合成含有目的突变碱基的引物进行扩增反应,然后用DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板,再进行转化和筛选。
本试剂盒使用的StarMut Enzyme及其配套buffer能够最大限度地保持扩增质粒的保真性,对引物设计的要求相对宽松、灵活,最多可实现21个连续碱基的插入或删除,适用于≤6 kb质粒的点突变。该方法操作简单快捷,突变阳性率高,严格按说明书操作,6个以下连续碱基的突变率可达90%以上。

StarMut Site-directed Mutagenesis Kit的原理和操作流程示意图

用途
• 6 kb以下质粒的单个或多个邻近碱基的置换(Substitution)、缺失(Deletion)、或插入(Insertion)

特点

• 操作简单:采用一步PCR法,不需要磷酸化引物,不需要连接反应,不需要特殊菌株
• 阳性率高:6个以下连续碱基的突变率可达90%以上
• 质控对照:提供Control Plasmid和Control Primers,通过X-gal琼脂平板呈色变化监控反应各组分的性能
• 提供针对高GC模板的High-GC Additive

产品组分

StarMut Enzyme 8μl
10 x StarMut Reaction Buffer 100μl
High-GC Additive 30μl
StarMut dNTPs 25μl
Dpn I(10 U/μl) 12μl
Control Plasmid(5 ng/μl) 10μl
Control Primers(10 μM of each) 10μl
ddH2O 1ml

 

 

 

 

 

 

 

保存条件

-20℃恒温保存一年,感受态细胞于-80℃保存,有效期6个月

使用方法

1.设置PCR反应体系:

Template Plasmid(5~10 ng/μl) 1μl
10 x StarMut Reaction Buffer 2.5μl
Primer Mixture(10 μM of each) 1μl
StarMut dNTPs 2μl
ddH2O 补足至25μl





 

2.加入 0.5 μl StarMut Enzyme混匀,置于PCR仪中
3.按以下设置进行PCR:


4.加入1 μl Dpn I,37℃温育1 hr
5.转化、培养



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