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T114 StarMut Multi Site-directed Mutagenesis Kit
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T114-01
10 rxn
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定点突变是一种广泛应用的分析蛋白和DNA的非常有力的工具。普通的定点突变试剂盒通常是基于反向PCR技术,采用高保真耐热DNA聚合酶和互补的突变引物向目的基因引入单个碱基或多个邻近碱基的突变、缺失、或插入。当遇到多个位点突变的需求时,利用单点突变试剂盒只能对目标位点逐一引入突变,耗时费力。

StarMut Multi Site-directed Mutagenesis (MSDM)Kit突破了传统的定点突变方法,只需要一步PCR反应,即可引入多个目标突变,操作简单快捷,突变阳性率高。该试剂盒针对单个目标突变只采用一条磷酸化的突变引物,利用StarMut MSDM Enzyme的耐热DNA聚合酶活性合成与模板互补的带有突变的的DNA链,然后通过该酶的连接酶活性修复突变DNA链之间的缺刻(nicks),使其连接成为一条与模板互补的突变单链DNA。经过多个PCR循环反应后,带有多个特定突变的DNA链成倍增长,经过DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板,环化的单链突变DNA可直接进行转化,通过DNA测序或限制性内切酶消化等方法筛选出目标突变质粒。本试剂盒适用于≤6 kb质粒的多点突变,根据质粒性质不同,最多可引入5个独立位点的突变、插入或删除。

用途

研究突变对蛋白功能或结构的影响

蛋白药物、基因工程酶的定向进化

特点

· 高效快速:采用一步PCR法,同时引入多个突变位点
· 操作简便:不需要磷酸化引物,不需单独的连接反应,不需要特殊菌株
产品组分

StarMut MSDM Enzyme
8 μl
10 x StarMut MSDM Buffer
100 μl
StarMut dNTPs
25 μl
Dpn I (10 U/ml)
12 μl
ddH2O
1 ml
保存条件

-20℃恒温保存一年
使用方法
1. 设置PCR反应体系:

Template Plasmid (5~10 ng/μl)
1 μl
10x StarMut MSDM Buffer
2.5 μl
Phosphorylated primers (20 μM)
2 μl
StarMut dNTPs
1 μl
ddH2O
补足至25 μl

2. 加入 1 μl StarMut MSDM Enzyme混匀,置于PCR仪中

3. 按以下设置进行PCR:

4. 加入1 μl Dpn I,37℃温育≥1 hr
5. 转化、培养


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