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T169 EZ-T™ Simple Cloning Vector
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T169-101
20 µl
210
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EZ-TTM Simple克隆载体是基于pBlueScript II SK(+) 质粒,通过对其多克隆位点区序列进行改造,去除了多克隆位点,再经酶切处理后获得具有突出的3’-末端T碱基的线性载体。EZ-TTM Simple载体可与Taq Tth DNA聚合酶催化的携带3’-末端A碱基的PCR产物互补连接,以利于下一步克隆或测序。由PfuPwoVentKOD等有3’®5’外切酶活性的DNA聚合酶催化反应的PCR产物,也可经Taq酶添加3’-A末端后,与EZ-TTM Simple载体连接。EZ-TTM Simple载体不含绝大多数常用的限制性内切酶位点,因此更适合用于含酶切位点的插入片段的亚克隆。经过严格工艺制备的EZ-TTM Simple克隆载体的3’-末端突出的T碱基稳定,载体自连几率低。严格按本说明书操作,克隆500 bp~2 kb PCR产物的蓝斑率可低于5%,白斑的插入阳性率在90%以上受载体自身大小的限制,2.5 kb以上PCR产物的克隆阳性率低于30%。本产品同时提供一份800 bp PCR产物(Control Insert)作为连接反应的阳性对照DNA测序可使用M13 ForwardM13 Reverse通用型引物。

用途 

• PCR产物的测序
• 含酶切位点PCR产物的亚克隆
• 利用lac promoter进行基因表达

特点

• 阳性率高:高纯度酶切型线性T载体,连接效率更高,蓝斑率低于10%
• 方便灵活:可于4oC运输;可与任何品牌的T4 DNA连接酶配合使用
• EZ-T™ Simple载体无常用酶切位点,利于含酶切位点基因克隆
• 无NdeI或NcoI位点,便于重组表达基因的克隆
• 提供纯化的PCR片段作为阳性质控对照
• 蓝白筛选:高表达活性的β-半乳糖苷酶,显色更快更深
• 批次稳定:遵循标准化生产流程,经过严格的质量检测

产品组分

EZ-T™ Simple Cloning Vector 40 ng/µl  20 µl
Control Insert 40 ng/µl  5 µl

保存条件

-20℃恒温保存

质检控制

使用GenStar T4 DNA连接酶进行连接时,当插入DNA对照( 800 bp)与载体的摩尔比例为3:1时,蓝斑率低于5%,有90%以上的白色菌落含插入DNA对照片段。经测序确认多克隆酶切位点及T碱基存在。

EZ-TTM Simple载体结构和序列

图1. EZ-TTM Simple载体环形图谱 

2. EZ-TTM Simple载体的多克隆位点区序列。

 

 

 

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