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A131 HotStart Taq DNA Polymerase
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GenStar HotStart Taq DNA Polymerase 是抗Taq单克隆抗体和高纯度Taq DNA聚合酶的混合制品,适用于热启动PCR。高温加热前,特异地结合在Taq酶活性区的抗体有效地抑制了DNA聚合酶的活性,从而抑制低温条件下由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体形成而导致的非特异性扩增。高温加热后,Taq抗体失活,暴露出Taq酶的活性区域,使之高效催化特异性结合的引物延伸,从而提高目的片段的产量,大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。使用本产品扩增得到的PCR产物3'端附有一个突出的“A”碱基,可直接用于T载体克隆。

用途

·   常规PCR扩增,提高特异性
·   实时荧光定量PCR
·   多重PCR
·   TA克隆

特点

·   高特异性:抗体型热启动,确保高效的常温抑制效果
·   高度灵敏:高纯度的酶带来优良的灵敏性
·   提高产量:特异性的改善可直接提高目标产物的产量
·   操作方便:室温下配制反应体系,热循环仪无需预热
· TA克隆:产物带3'突出A碱基,可直接进行TA克隆实验

产品组分

HotStart Taq DNA polymerase (2.5 U/μl)
100 μl
10 x HotStart Taq Buffer
0.65 ml



 

 

保存条件

-20℃恒温保存一年

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

·    以λDNA为模板,可以有效扩增8 kb的DNA片段
·    以基因组DNA为模板,可以有效扩增单拷贝基因
·    55℃反应10分钟,抗体对Taq DNA聚合酶的活性抑制效率达95%以上
·    无内切酶、外切酶污染
·    PCR检测无残留宿主基因组DNA
·    室温存放一周无明显活性降低

FAQ:

Q1: 为什么常规PCR反应体系需要在冰上配制并且容易产生非特异产物或引物二聚体?
A1: 尽管Taq DNA聚合酶的最佳活性温度为70~75℃,该酶在37℃时已经开始有活性。因此在反应温度升高的过程中,Taq DNA聚合酶已开始催化非特异性结合的引物延伸,从而导致非特异性扩增和引物二聚体形成。
Q2: 常用的hotstart(热启动)技术有哪几种方法?
A2: 物理阻隔、化学修饰、抗体抑制以及对酶的序列进行改造等。
Q3: 抗体型热启动法有哪些优势?
A3: 抗体型热启动法既克服了物理阻隔法导致的因PCR前几个循环混合不均匀而降低产量的问题,也不必像化学修饰法那样延长初始变性时间,无需改变PCR仪的设置,使用起来非常方便。

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