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T173 EZ-T™ A Tailing Kit
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T173-01
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EZ-T™ A Tailing Kit利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性,在dATP存在的条件下,可在任意平末端线性DNA片段的3’-端加上单个脱氧腺嘌呤(dA)碱基,使平末端的DNA片段进行 TA克隆成为可能。与平末端DNA片段直接进行克隆相比,TA克隆具有更高的克隆效率,可以大大提高实验的成功率。本产品用途广泛,适用于各种平末端双链DNA片段的加dA反应,包括由Pfu、Pfx、Pwo、Phusion、Pyrobest或KOD等高保真DNA聚合酶扩增、用限制性内切酶如EcoRV、SmaI等消化、以及用DNA聚合酶补平后得到的平末端线性DNA片段。

用途
· 各种平末端线性DNA片段的克隆和测序

特点
· 适用范围广:PCR扩增、平端内切酶消化等各种需要进行TA克隆的线性平末端DNA片段
· 方便快捷:EZ-T™ 2×A-Tailing Buffer中含有除酶和目的DNA片段以外的所有成分,减少加样步骤,避免污染;加A反应产物无需纯化,直接与T载体连接
· 提供纯化的平末端PCR片段(EZ-Blunt™Control Insert)作为阳性质控对照

产品组分

EZ-T™ A-Tailing Enzyme
10 μl
EZ-T™ 2×A-Tailing Buffer 1 ml
EZ-Blunt™ Control Insert(40 ng/μl) 30 μl
保存条件

-20℃恒温保存一年

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产品 货号 页码
Pfu DNA Polymerase A121-01 032
HiFiTaq DNA Polymerase A116-01 035
2×HiFiTaq PCR StarMix with Loading Dye A017-01 020
StarPrep Gel Extraction Kit D205-01 105
StarPrep PCR & DNA Fragment Purification Kit D206-01 107

通用测序引物序列
T7 Promoter                                             5· -d(TAATACGACTCACTATAGGG)-3·
T3 Promoter                                             5· -d(ATTAACCCTCACTAAAGGGA)-3·
M13 Forward(-20)                                  5· -d(GTAAAACGACGGCCAGT)-3·
M13 Forward(-40)                                  5· -d(GTTTTCCCAGTCACGAC)-3·
M13 Reverse                                             5· -d(CAGGAAACAGCTATGAC)-3·
LB-Amp-X-gal-IPTG琼脂平板的快速制作方法
1. 根据所需平板数量(n),按每个平板加入20 μl的50 mg/ml X-gal,50 μl 的100 mM IPTG和30 μl灭菌ddH2O成比例混合上述试剂
2. 吸取100 μl混合试剂,加到含有100 μg/ml Amp 的LB琼脂平板表面,并迅速涂布均匀
3. 37oC放置30分钟即可涂菌
(注:过夜孵育后如果菌落显色不明显,可将平板在4oC放置10分钟,然后再于37oC孵育,将明显改善显色效果。)

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