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T170 EZ-Blunt™ Blunt-end Ligation Kit
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T170-01
20 rxn
638
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EZ-Blunt™ Ligation Kit是高效、便利的平末端DNA片段克隆专用试剂盒,用于克隆由Pfu、Pfx、Pwo、Phusion、Pyrobest或KOD等高保真DNA聚合酶催化反应的平末端PCR产物,以及限制性内切酶消化或DNA聚合酶补平得到的平末端线性DNA片段。EZ-Blunt™载体是基于pBlueScript II SK(+)质粒,经EcoRV酶切、纯化等处理后获得的平末端线性载体,具有5· -端磷酸根和3· -端羟基。EZBlunt™载体不含NdeI或NcoI限制性内切酶位点,故可用于克隆含上述酶切位点的基因;其多克隆位点适合于插入片段的亚克隆。
本试剂盒提供的EZ-Blunt™连接酶在高效连接的同时减少了使用普通DNA连接酶常见的载体自身环化问题,提高插入片段的连接效率。试剂盒还提供600 bp 平端PCR产物(EZ-Blunt™ Control Insert)作为连接反应的阳性对照。用本试剂盒克隆约1 kb大小PCR片段的蓝斑率(即自连率)通常低于30%。受载体自身大小的限制,本产品不适于克隆3 kb以上的PCR产物。DNA测序建议使用M13 Forward和M13 Reverse或T7 promoter和T3 promoter 通用型引物。
用途
· 无EcoRV位点的平末端PCR产物的克隆和测序
· 利用载体的酶切位点,方便亚克隆
· 利用lac promoter进行基因表达
特点

  1. 方便快捷:PCR产物无需加磷酸反应,直接连接
  2. 无NdeI或NcoI位点便于重组表达基因的亚克隆
  3. 提供纯化的PCR片段作为阳性质控对照
  4. 蓝白筛选:高表达活性的β-半乳糖苷酶,显色更快更深
  5. 批次稳定:遵循标准化生产流程,经过严格的质量检测

产品组分

EZ-Blunt™ Cloning Vector(40 ng/μl) 20 μl
EZ-Blunt™ Control Insert(40 ng/μl) 5 μl

保存条件

−20℃恒温保存一年

质量控制
插入DNA对照与EZ-Blunt™ 载体连接的摩尔比例为3:1时,蓝斑率低于30%,有90%以上的白色菌落含插入DNA对照片段。经测序确认多克隆酶切位点及PCR产物存在。
EZ-Blunt™载体环形图谱




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