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A161 ExPfu DNA Polymerase
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A161-01
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A161-05
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A161-10
150 U×10
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【产品概述】

ExPfu高保真DNA聚合酶是一种基于Pfu改造的混合酶,具有5'到3'DNA 聚合酶活性和3'到5'的外切酶活性(即校读活性),能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的35倍,反应速度视模板复杂程度约为2-4 kb/min。对于一般性模板可以保证10 kb的扩增长度。本产品适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增,如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等。使用ExPfu高保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3’端突出碱基,不可直接用于TA克隆。

【用途】

• 高保真扩增,长片段的快速扩增,如基因克隆、定点突变等。
• 高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。

【特点】

• 高保真性:保真性是Taq 的35倍, Pfu 的5倍
• 高效扩增:可扩增10 kb的长片段
• 批次稳定:遵循标准化生产流程,经过严格的质量检测

产品组分

ExPfu DNA Polymerase (1.5 U/μl)

100 μl

5 × ExPfu Buffer

1.5 ml





【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【注意事项】

1. 在50μl的反应体系中ExPfu使用量为0.5~1.5U,不要超过2U。
2. ExPfu高保真DNA聚合酶的3’→5’的外切酶活性可降解引物,用酶量过多会导致引物部分或完全降解,电泳检测时产
生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTPs,再加酶,并立即进行PCR反应。
3. ExPfu高保真DNA聚合酶扩增反应时应使用高质量的dNTP(Cat.No.A113-01),不推荐使用dUTP和其它可诱导产生
dUTP或类似物的试剂,通常使用终浓度各为0.2mM的dNTP就可以达到比较好的效果。
4. ExPfu扩增后的PCR产物经过纯化后,可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接,也可先连接到线性平末端克隆载体
上(如EZ-Blunt Blunt-end Ligation Kit, Cat.No.T170-01),再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接,应
先纯化再对PCR产物的3’端添加A碱基,加A反应可使用EZ-T™ A-Tailing Kit( Cat.No.T173-01)。

【质量控制】

• 以λ DNA为模板,可以有效扩增10 kb的DNA片段
• 以基因组DNA为模板,可以有效扩增单拷贝基因
• 无内切酶、外切酶污染

 

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