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A134 HotStart HiFiTaq DNA Polymerase
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A134-01
250 U
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【产品概述】

本产品是抗HiFiTaq抗体和高纯度的GenStar HiFiTaq DNA polymerase的混合制品,适用于较长DNA片段的热启动PCR反应。

GenStar HiFiTaq DNA Polymerase由高纯度Taq DNA Polymerase与具有3’®5’DNA外切酶活性的高保真DNA Polymerase按最佳比例混合制备,配以精心优化的反应缓冲液,兼具高效扩增与高保真性的双重特点。该酶的保真性是Taq酶的3-4倍,适合扩增对保真度要求较高的10 kb以下的DNA片段,如基因诊断、较长DNA片段的克隆和点突变等应用。

然而,HiFiTaq DNA Polymerase在低温状态下存在微弱活性,因而可能导致由于引物与模板非特异性杂交或引物二聚体形成而产生的非特异性扩增,从而影响PCR产物的产量。HiFiTaq抗体可特异性结合HiFiTaq DNA polymerase。高温加热前,HiFiTaq的聚合酶活性受到抑制,不会导致非特异性扩增;高温变性后,抗体与酶分离,HiFiTaq DNA Polymerase恢复催化活性,使特异性结合的引物延伸,从而大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。该反应体系可在室温下配制,无需在冰上完成。此外,抗体结合的热启动方法克服了化学修饰和物理阻隔等方法造成的需要延长预变性时间和需要几个PCR循环才能充分释放DNA Polymerase聚合酶活性的缺点,对酶的损伤最小,使用更为简便。

使用HotStart HiFiTaq DNA Polymerase扩增得到的一部分PCR产物的3’端附有一个突出的“A”碱基,可直接用于TA克隆。进行加A反应可提高TA克隆的成功率。


【保存条件】

-20保存,保质期24个月。

 

【补充说明】

  1. TA克隆:使用HotStart HiFiTaq DNA Polymerase扩增的一部分PCR产物附有3’-末端突出的A碱基,可以直接进行TA克隆。克隆1 kb以上的PCR产物时,建议先使用EZ-T A Tailing KitCat# T173)对PCR产物进行加A处理后,再与T载体连接,以提高克隆阳性率。
  2. 平端克隆:使用HotStart HiFiTaq DNA Polymerase扩增的PCR产物可直接克隆到含有5’-磷酸基团的平端克隆载体中,如我公司提供的EZ-Blunt Blunt-end Ligation KitCat# T170)。
  3. HotStart HiFiTaq扩增10 kb以上的DNA片段的效率较低。如需大量扩增10 kb以上片段时,建议使用LongTaq DNA PolymeraseCat# A124)或LongTaq PCR StarMixCat# A125A126)。
  4. 扩增复杂结构 (GC含量高) DNA片段时,建议使用High-GC DNA Polymerase (Cat# A119-01)直接扩增,也可使用BetaineCat# A141)DMSOPCR添加剂摸索出最佳反应条件,以提高PCR反应的灵敏度和特异性。

 

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