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A156 SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase Kit
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A156-01
150 U
990
现货
990

【产品概述】
SuperStar超保真DNA聚合酶是一种混合酶,具有5’到3’DNA 聚合酶活性和3'到5'的外切酶活性(即校读活性),能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的48倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度,约相当于普通Taq DNA Polymerase的4倍、Pfu DNA Polymerase的8倍。该酶合成能力很强,即使是复杂的模板,也能快速准确的完成反应,尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增,如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等,也可用于DNA片段的末端补平。使用SuperStar超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3'端突出碱基,不可直接用于TA克隆。

【适用范围】

高保真扩增,长片段的快速扩增,如基因克隆、定点突变等。

高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。

【产品组分】

SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase (1.5 U/μl)                       100  μl

5 × SuperStar Buffer                                                             0.9 ml x 2

5 × SuperStar High-GC Buffer                                                      450 μl

50 mM MgCl2                                                                             450 μl

100% DMSO                                                                                75 μl

10 mM dNTPs                                                                             160 μl

6*Loading Buffer                                                                         500 μl

5 × SuperStar Buffer和5 × SuperStar High-GC Buffer 均含有7.5 mM MgCl2。如反应需高浓度MgCl2,可补加适量50 mM的MgCl2溶液。

【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【活性定义】

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

【注意事项】

1.     在50 μl 的反应体系中SuperStar超保真DNA聚合酶使用量为0.5~1.0 U,不要超过2 U。

2.     SuperStar超保真DNA聚合酶扩增时延伸速度约为15~30 sec/1 kb,不要超过1 min/1 kb。应根据扩增产物的长度和模板的复杂性设置相应的延伸时间,复杂性较低时(例如:质粒、λDNA)可用15 sec/1 kb的延伸时间;复杂性较高的基因组DNA模板,延伸时间则应为30 sec/1 kb;对于有些cDNA模板,延伸时间可以增加到40 sec/1 kb。

3.     SuperStar超保真DNA聚合酶的3’→5’的外切酶活性可降解引物,用酶量过多会导致引物部分或完全降解,电泳检测时产生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTP,再加酶,并立即进行PCR反应。

4.     用SuperStar超保真DNA聚合酶扩增时,当引物长度大于20个碱基,复性温度为Tm+3℃;当引物小于20个碱基,复性温度为最低的Tm值。建议使用引物终浓度为0.5 μM,如果需要可在0.2~1.0 μM之间,比Taq酶高。

5.     SuperStar超保真DNA聚合酶具有极高的热稳定性,变性温度可以高于98℃。我们推荐大多数模板的初始变性温度是98℃,变性时间为30 sec。

6.     在SuperStar超保真DNA聚合酶扩增反应时应使用高质量的dNTP(Cat. No. A113-01),不推荐使用dUTP和其它可诱导产生dUTP或类似物的试剂,通常使用终浓度各为0.2 mM 的dNTP就可以达到比较好的效果。(接下页)

SuperStar超保真DNA聚合酶的PCR产物经过纯化后,可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接,也可先连接到线性平末端克隆载体上(如EZ-Blunt Blunt-end Ligation Kit,Cat. No. T170-01),再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接,应先纯化去除SuperStar High-Fidelity DNA Polymerase后,再对PCR产物的3’端添加A碱基,加A反应可使用EZ-T™ A-Tailing Kit(Cat. No. T173-01)。

 【质量控制】

• 以λ DNA为模板,可以有效扩增20 kb的DNA片段
• 以基因组DNA为模板,可以有效扩增单15 kb的基因
• 无内切酶、外切酶污染


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