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C750 Mouse KC/IL-8 ELISA Kit
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C750-01
48 t
1820
现货
1820
C750-02
96 t
2800
现货
2800

【产品概述】

       小鼠KC角化细胞源性细胞因子(keratinocyte-derived Cytokine, KC),也称为CXCL1或N51, 最初是从成纤维细胞中作为PDGF诱导的即早基因(Immediate early gene)被鉴定出,其编码一个约8kDa的分泌蛋白。根据小鼠KC的蛋白质序列,其属于alpha(CXC)趋化因子家族。除有丝分裂原活化的成纤维细胞外,KC还能在细菌或LPS刺激的腹膜及肺巨噬细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞上诱导表达。研究表明糖皮质激素可抑制有丝分裂原对KC的诱导表达。小鼠KC的cDNA编码96个氨基酸残基的前体蛋白,N末端19个氨基酸残基经剪切产生77个氨基酸残基的成熟KC蛋白。

       小鼠KC的蛋白序列与另一个alpha趋化因子MIP-2具有63%的序列同一性。与其他alpha趋化因子类似,小鼠KC是中性粒细胞的强诱导剂和激活剂。小鼠KC和MIP-2的生物学活性是通过独特的小鼠IL-8受体来介导的。小鼠IL-8R与人IL-8Rß和IL-8Rα分别具有71%和68%的序列同一性。由于在小鼠中还没有鉴定到IL-8同源物,所以MIP-2和KC被认为在功能上与IL-8相似,在小鼠中作为主要的促炎症反应alpha-趋化因子。 

       本实验采用双抗体夹心ELISA。用抗小鼠IL-8单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品,其中的IL-8会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗小鼠IL-8抗体,抗小鼠IL-8抗体与结合在单抗上的小鼠IL-8结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有IL-8,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;加终止液变黄。在450nm下测OD值,IL-8浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出标本中IL-8浓度。

品规格及组分】

货号及规格

C750-01(48 Tests)

C750-02(96 Tests)

保存条件

1a标准品

1支(冻干)

2支(冻干)

4℃

1b标准品和标本稀释液

1瓶

1瓶

4℃

2a浓缩生物素化抗体100×

1支

2支

4℃

2b生物素化抗体稀释液

1瓶

1瓶

4℃

3a浓缩酶结合物100×

1支

2支

4℃(避光)

3b酶结合物稀释液

1瓶

1瓶

4℃

4浓缩洗涤液20×

1瓶

1瓶

4℃

显色剂

1瓶

1瓶

4℃(避光)

终止液

1瓶

1瓶

4℃

抗体包被板条

8×6

8×12

4℃

封板胶纸

2张

4张

4℃

说明书

1份

1份

 

【注意事项】

1. 试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品,其他成分不可冻结。

2. 浓缩生物素化抗体,浓缩酶结合物体积小,运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000 rpm离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

4. 若需要分次使用标准品,在标准品复溶后应按每一次用量分装,将其放在-20或-70℃贮存。避免反复冻融。

5. 使用干净的塑料容器配制洗涤液,使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7. 不要用其它来源的试剂混合或替代该产品的组分,不同批号的试剂盒组份不能混用,请在有效日期内使用本产品。

8. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔,加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔孵育的时间一样。

9. 充分混匀对反应结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率进行振荡)。

10. 避免操作过程中酶标板干燥,干燥会使酶标板上生物成分迅速失活,影响实验结果。

11. 适当的稀释样品,使样品值落在标准曲线范围内,根据待测因子含量高、中、低的不同,建议采用1:100、1:10、1:2稀释样品。

12. 如果样品OD值高于最高标准,适当增加稀释度并重复检测。

13. 标准品稀释液,操作人,移液方式,洗涤方法,孵育时间及温度,试剂盒批次的不同均可能会导致结果的差异。

14. 此法可有效的消除可溶性受体、结合蛋白以及生物样品中的其他因素的干扰。



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