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T183 EZ-Blunt Simple Zero pTOPO Cloning Kit
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T183-10
20 rxn
680
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680

【产品概述】

本产品不同于使用T4 DNA连接酶的传统克隆方法,而是采用拓扑异构酶I(Topoisomerase I),可短时间内(几秒钟-几分钟)高效连接DNA片段。连接产物转化大肠杆菌时,无需冰浴和热激,室温5分钟内完成转化,转化后大肠杆菌37℃复苏10分钟即可涂板。有效连接片段可长达10 kb。此外,本产品无自连、零背景,无需蓝白斑筛选,阳性克隆比例很高,极少出现空载体,是简单、快速、零背景免筛选的TOPO平末端克隆载体。

本产品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行酶切时,与含多克隆位点的T载体不同,酶切反应将不受T载体上其它酶切位点上的影响,增加了成功率。

测序可以采用M13F/M13R通用引物测序(见下页质粒图谱)。


pTOPO-BluntSimple载体图谱:


pTOPO-Blunt Simple载体通用测序引物序列:        

M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R: CAGGAAACAGCTATGACC


pTOPO-Blunt Simple载体多克隆位点序列:

【产品组分】
pTOPO-Blunt Simple Vector(30ng/μl)
20 μl
1 kb Control(30ng/μl)
5 μl
10 x Enhancer
20 μl

 

【保存、运输条件】

−20℃恒温保存一年。

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