【新品上市】专治反转录实验的各种不适
发布时间:2022-03-08
      说起反转录,小编相信当大家提取出高质量的RNA时,肯定开心的手舞足蹈,满心欢喜想着接下来的实验轻轻松松搞定!这样想没错,但是如果你想在论文或者汇报中得到漂亮的数据,那反转录这一步也非常关键。所以今天小编给大家梳理了反转录实验过程中需要注意的几个要点,希望大家在实验过程中多多留意,获得漂亮的数据。

一、选择最佳的反转录引物

      反转录引物一般分为三类:oligo dT、随机引物、基因特异性引物。oligo dT,可识别具有poly(A)尾的真核mRNA,从而获得真核生物mRNA全长。随机引物,可以结合到样本中的任何类型RNA,但并不能获得整个基因全长的cDNA。基因特异性引物,是根据实验者的特定需求设计出来的,适用于目的序列已知的情况,产生所需的cDNA。

 

二、考虑RNA的二级结构

      若要获取全长RNA的反转录,那么我们就需要考虑RNA内部是否含有二级结构,因为反转录酶在遇到二级结构时会终止反应或从模板上脱落下来。通常GC含量高的基因意味着RNA很难被变性且不可能是单链。高效且热稳定性强的反转录酶,可有效克服高GC、低丰度模板的反转录难题。

 

三、去除基因组DNA

      污染性基因组DNA(gDNA)可能会干扰RNA反转录,并导致后续PCR或qPCR实验结果出现假阳性、高背景或检测率低等情况。通常在RNA提取过程中加入合适浓度的DNase I,37℃加热10-15min,去除干扰基因组DNA。另外,如果是做qPCR实验,更简单的方法则是选用含有去除基因组DNA的试剂盒。

 

四、选择合适的反转录方法

      RT-PCR和RT-qPCR有两种选择:一步法和两步法。一步法,反转录和(q)PCR扩增是在同一个反应管中进行。两步法,反转录与(q)PCR扩增反应单独进行。两种方法各有优缺点。

      注意事项这么多,您需要一套可全面应对上述问题的高性能产品!

GenStar新一代StarScript III M-MLv反转录酶,拥有卓越的cDNA合成能力,全面提升合成产量、提高热稳定性,克服了低丰度、复杂模板难题!


产品特点

·热稳定性

可耐受37-65℃反应温度,适合高GC复杂模板的反转录反应。

·兼容性强

适用于不同物种、各种类型的RNA模板。

·灵敏度高

针对各种RNA模板,克服低丰度、复杂模板难题。

·产品全面

根据不同的实验应用场景,可选择含去基因组试剂、预混试剂或试剂盒。

·应用广泛

可应用于基因全长cDNA合成、qPCR等实验。


产品性能展示

1. StarScript III耐受37-65℃反应温度

不同的反转录反应温度获得的水稻cDNA,1 kb片段扩增

      StarScript II最佳反应温度为42℃,耐受50℃;StarScript III最佳反应温度50-55℃,耐受65℃。


2. 低丰度、复杂模板也能完美反转录

以水稻RNA为模板,不同品牌反转录反应后,qPCR检测结果

      GenStar StarScript III灵敏度高,对于高GC、低表达基因的检测效果理想。


3. 线性范围广,反转录效果佳

GenStar StarScript III一步法qRT-PCR试剂盒-探针法(UNG)(Cat#A338)检测小鼠RNA模板,检测基因GAPDH

      结果显示,A338灵敏度高,检测下限可达1 pg;荧光信号采集能力强,兼顾高扩增效率;具防污染体系,有效避免气溶胶污染。


新品推

通用型反转录酶

      针对不同的RNA模板,性能全面提升。使用灵活,体系可跟根据实验需求随时调整。


cDNA第一链合成试剂盒/预混试剂

      ·反转录试剂盒:包含反转录反应的全套试剂,可直接使用可调整使用。

      ·反转录预混试剂:反转录反应无需调整,操作简便。

      ·去基因组反转录预混试剂:去gDNA,定量结果准确可靠。

      ·一管化去基因组反转录预混液:一管化、含去gDNA,qPCR模板制备的最佳选择。


一步法RT-PCR

      一步法RT-PCR专用预混液,反转录和PCR在同一管内进行,操作便携。


一步法qRT-PCR

      高特异,高灵敏,速度快,可选防污染体系,适用于RNA病毒检测的qRT-PCR预混液。

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