师妹每次提RNA都要整理仪容仪表
实验台也是上上下下打扫的非常亮堂
最后再双手合十，嘴里不知道念叨着什么
这才能开始提取RNA！
这一通骚操作
秀的小编我要拜她为玄学师父了
哈哈哈~
当然，如果能得到理想RNA，
那我相信各位小主也要拜她为师了！
毕竟对很多同学来说
提取RNA简直就是噩梦般的存在
我们来唠一唠
如何提取高品质的RNA
首先，如何确定RNA质量呢？
常用的方法有UV光谱分析、荧光染料、Agilent 2100 Bioanalyzer™、琼脂糖凝胶电泳等。这里小编重点介绍UV光谱分析和琼脂糖凝胶电泳法。UV光谱分析
-
A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，如DNA、RNA、引物等。
-
A280nm是蛋白质、酚类最高吸收峰的吸收波长。
-
A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，如多肽、苯酚等。
-
A260/A280的比值在1.8-2.2，说明RNA纯度较好。
若比值<1.8，说明提取的RNA中存在蛋白质、酚类等污染；
若比值>2.2，说明提取的RNA已被DNA污染或者RNA已降解。
-
A260/A230的比值在1.8-2.0，说明RNA纯度较好。
若比值小，说明提取的RNA中可能存在糖类、盐或有机溶剂。
琼脂糖凝胶电泳
对于真核生物来说，完整的RNA有3个条带：28S条带最亮，其次是18S条带，5S条带最淡（有些试剂盒提取RNA的过程会将5S条带过滤掉）。通过琼脂糖凝胶电泳检测28S、18S的条带亮度比值评估RNA的纯度和完整性。
-
若28S和18S条带清晰、明亮、锐利，且28S条带亮度约为18S的1.5-2.5倍，则说明RNA质量较好。
-
若RNA条带不亮或缺失，可能与上样量不足、RNA在凝胶中发生扩散或降解等因素有关。
-
若条带弥散，可能原因有RNA已降解、电泳时电压或电流过大、上样量过高或过低等。
-
若条带大小超过28S，说明可能存在基因组DNA污染，建议使用DNaseⅠ处理。
接下来，当然是提取高品质的RNA！
正确储存样品
采集组织及细胞之后，应立即灭活内源性RNase，以防RNA降解。小编与大家分享了3种方法。
-
样品加入裂解液（如胍盐）后，立即彻底匀浆。
注：加入裂解液之前必须确保样品处于冷冻状态。 -
使用液氮快速冷冻样品后再置于-80℃保存。必须保证组织块足够小，才能使其浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保RNase瞬间失活。
注：待提取样品应避免反复冻融。为了确保RNA的提取质量，请尽量使用新鲜样品。
-
将样品充分浸泡在RNA稳定剂中。它是一种无毒、水相收集试剂，可稳定并保护完整、未冷冻的组织和细胞样品中的RNA。
注：组织样品切片一定要薄（<0.5 cm），以便在RNase破坏RNA之前稳定剂迅速渗透组织。
RNA提取纯化前的准备工作
-
所有物体表面（如实验仪器、工作台面）可用去RNase污染的溶液擦拭。
-
建议设立RNA抽提专区，实验用的器具亦可专用。
-
使用的玻璃器皿可进行150℃干热灭菌4小时的处理。
-
塑料器皿可用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在室温或37℃处理12小时，然后再高温高压灭菌以除去残留的DEPC，或者在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗再灭菌烘干，即可去除RNase。
-
采用无菌操作规程，注意经常更换新手套，以避免RNase污染。
选择合适的RNA提取纯化方法
(1)溶液法
又称异硫氰酸胍/苯酚法、TRIzol法。异硫氰酸胍不仅仅是一种强蛋白变性剂，而且也是很强的RNase抑制剂。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中蛋白质、核酸物质解聚，从而释放核酸。这种方法简便快捷，适用于动植物细胞、组织、酵母细胞、细菌等多种样品的总RNA提取。
(2)离心柱法
离心柱的材料通常是玻璃纤维、硅衍生物或者离子交换膜，可以在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA。操作过程更加方便快捷，且提取的RNA纯度较高，可是存在着有物种特异性、价位较高等不足。
提取过程中需要注意
(1)彻底匀浆样品
细胞或组织的充分匀浆能够减少RNA的损失和降解。大部分培养细胞加入细胞裂解液后，使用吸管或加样器吹打等较温和的方式匀浆。而组织样本、酵母以及细菌通常使用更加剧烈的方式，例如细菌就需要用酶消化其细胞壁，从而保证细胞充分裂解和RNA的提取得率。
(2)RNA的正确沉淀
一般情况下，可使用异丙醇来沉淀RNA。也有使用共沉淀剂（如Glycogen、Linear Acrylamide）来辅助进行RNA沉淀的特殊情况，以满足一些下游应用的需要。注意沉淀后应避免过于干燥，以防RNA沉淀难以重新溶解。
(3)RNA的重悬
许多RNA提取步骤的最后一步操作就是溶解纯化的RNA沉淀，通常使用DEPC处理水进行重悬溶解即可，也有使用特殊的重悬溶液的情况。理想的重悬溶液应该满足三点要求：无RNase污染、较低的pH值（pH 6-7）、含有螯合剂，以保护RNA不被带入的RNase降解。为了帮助溶解，RNA沉淀置于重悬溶液后可在50 ~ 60℃温度下孵育5 min，并不时轻摇以加速溶解。
(4)RNA的保存
重悬的RNA若需短期保存，可置于-20℃。或者将其适量分装后置于-65 ~ -80℃长期保存，避免反复冻融。值得注意的是RNA的半衰期比较短、易降解，建议抽提后尽快进行后续实验。
重点来啦！总RNA提取需要一款优秀的试剂
GenStar明星产品推荐：TRIGene总RNA提取试剂（Cat# P118）
-
通用性强：适用于动植物细胞、组织、酵母细胞、细菌等多种样品的总RNA提取。
-
一剂多用：同一样本可提取总RNA、DNA和蛋白质。
-
提取率高：每1×106培养细胞可提取约10 μg总RNA。
-
性价比高：贴心的价格，高品质的结果。
GenStar相关优质产品
